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在获得想要的DNA片段之后,使用合适的载体可以对这些片段进行操作,实现想做的研究。目前,杭州载体构建实验,载体构建费用相关,本公司有很多载体供大家进行各类实验,西安淳风生物科技有限公司,西安淳风生物科技有限公司,一般情况下,大家只需要选择并找到合适的载体就可以了。少数情况下,可能会涉及到需要对载体进行改造。 方法 通过酶切将DNA片段连入载体 实验原理 DNA连接酶可以催化相邻DNA链的5‘磷酸基团与3‘羟基形成磷酸二酯键,从而完成连接。常见的依赖限制性内切酶的连接,找杭州载体构建实验,专业载体构建服务相关,是将载体和目标DNA片段(外源片段)进行相同方式的酶,产生可以互补配对的粘性末端,然后进行连接。根据使用的酶数量,可以分成双酶切、单酶切两种类型。
人工构建的质粒可以集多种有用的特征于一体,我们推荐杭州载体构建实验,载体构建服务相关,如含多种单一酶切位点、抗生素耐药性等。常用的人工质粒运载体有pBR322、pSC101。pBR322含有抗四环素基因(Tcr)和抗氨苄青霉素基因(Apr),并含有5种内切酶的单一切点。如果将DNA片段插入EcoRI切点,不会影响两个抗生素基因的表达。但是如果将DNA片段插入到Hind Ⅲ、BamH Ⅰ 或 SalⅠ切点,就会使抗四环素基因失活。这时,含有DNA插入片段的pBR322将使宿主细菌抗氨苄青霉素,但对四环素敏感。没有DNA插入片段的pBR322会使宿主细菌既抗氨苄青霉素又抗四环素,而没有pBR322质粒的细菌将对氨苄青霉素和四环素都敏感。pSC101与pBR322相似,只是没有抗氨苄青霉素基因和PstI切点。质粒运载体的最大插入片段约为10 kb(kb表示为千碱基对)。
单酶切(或者产生两个平末端的双酶切)由于载体产生的粘性末端可以发生自连,需要使用去磷酸化酶处理载体,消除其5‘磷酸基团防止自身连接。而双酶切一般不会产生可以自连的粘性末端,不需考虑这一问题。 服务周期 10个工作日
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