色谱柱的选择
离子交换色谱通常选用粗短柱,上海宸乔生物科技有限公司,上海宸乔生物科技,即高径比小的色谱柱
若样品溶液体积较多,口碑好的核酸分离纯化柱,提供价格,可以分多次上样,注意每次上样时间间隔,可根据电导色谱峰确定下一次上样时间
案列介绍
Unique Autopure蛋白纯化系统 凝胶过滤色谱分离蛋白质
生物纯化层析柱型号-上海宸乔生物科技有限公司
材料
色谱介质:Sephacryl S-200,蛋白质分离范围(5~250)×103
色谱柱:XK16/60预装柱
色谱设备:Unique Autopure25
混合样品:含单克隆抗体,分子量180000;牛血清白蛋白(68000),溶菌酶(14000)
NaOH 0.5 mol/L
NaCl 200 mmol/L
PB 20 mmol/L
PH7.0 缓冲液
方法
1. 凝胶除菌处理:超纯水冲洗柱子后,口碑好的核酸分离纯化柱,专业商家,用0.5mol/L NaOH 正向冲洗柱,流速 3mL/min,冲洗3 柱体积
2. 平衡: NaOH 处理完毕后,用超纯水冲洗 2 柱体积,接着用含 200mmol/LNaCl 和20mmol/L PB 的 7.0PH缓冲液冲洗 5~10倍柱体积
3. 上样:平衡完毕后,选择样品泵进行上样,上样流速3mL/min,上样体积为 1mL
4. 洗脱:上样结束后,用平衡缓冲液进行洗脱
5. 清洗与保存
纯化结束后,口碑好的核酸分离纯化柱,效果好,用 0.5mol/L NaOH 反向冲洗 2 柱体积,冲洗时间 30~60min,冲洗结束后,用超纯水正向冲洗 5
柱体积,再用 20%乙醇冲洗 3柱体积,然后拆下柱子,两端封死,低温保存
问题分析和解决方案
1、色谱分离前如何净化样品
在色谱分离前,对样品进行离心和过滤,离心能除去大部分块状物,如果离心后样品仍不清澈,可用滤膜过滤
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