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  • 更新日期:2020-04-11
产品说明

这些方法皆因方法学的问题而不能获得精确的定量,而微滴式数字PCR系统通过对样品的微滴化处理及目标因子的绝对拷贝数定量,为甲基化程度的精确定量检测提供了一种全新的技术而QX200检测系统,独特的微滴化技术完全可以代替刚刚兴起的二代测序法来进行的无创伤产前诊断,从而提高工作效率及节约成本
ChemiDoc MP凝胶成像分析系统_凝胶成像分析系统厂家相关-北京科誉兴业科技发展有限公司
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请问什么是逆转录PCR?
2.逆转录PCR(RT-PCR):以由mRNA逆转录而来的DNA为模板,由此产生出来的DNA不带有内含子(基因中不具意义的段落),常应用于分子克隆技术
RT-PCR与PCR的区?
RT-PCR 为反转录PCR(reverse transcription PCR)和实时PCR(real time PCR)共同的缩写。逆转录PCR,或者称反转录PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR),是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形。
在RT-PCR中,一条RNA链被逆转录成为互补DNA,再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。实时PCR(real-time PCR),查QX200微滴式数字PCR仪,数字PCR仪供应相关,属于定量PCR(Q-PCR)的一种,以一定时间内DNA的增幅量为基础进行DNA的定量分析。real time PCR 的定量使用荧光色素,目前有二种方法。
一种是在ds DNA中插入特异的荧光色素,例如SYBR Green荧光染料;另一种使用一种能与增幅DNA序列中特定寡核酸序列相结合的一种荧光探针(probe),如Taqman探针。两种方法原理不同。SYBR Green荧光染料游离时不发光,当反应体系中存在双链DNA时,SYBR Green与双链DNA结合,此时才发光。
Taqman探针带有一个荧光基团和一个淬灭基团,荧光基团连接在探针的5’末端,而淬灭基团则在3’末端。PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5"-3"外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,此时荧光基团发出的荧光信号可以被检测到。
real time PCR 与 reverse transcription PCR 相结合,能用微量的RNA来找出特定时间、细胞、组织内的特别表达的遗传基因。这两种RT PCR的组合又被称之为“定量RT-PCR(quantitative RT-PCR)”RT-PCR和一般的PCR相比原理上没有太多的区别,无非就是在反转时候RNA的定量,不同模板的设定。
对引物没有特别的要求,能特异代表目的基因就行。real-time PCR根据原理的不同,引物选择也不同。通常用的是SYBR Green的方法,北京科誉兴业科技发展有限公司,科誉兴业,这种方法引物在RT-PCR的基础上需要注意:1。退火温度同内参;2。片段长度不要超过200;real-time PCR的引物可以跑RT-PCR,反之不一定。
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