ATTO-TEC_atto-tec

ATTO-TECGmbH成立于1999年秋季，是锡根大学的衍生公司。这里的决定性因素是四位创始人在有机激光和荧光染料方面数十年的科学经验。在1990年代，Drexhage教授的研究团队专注于合成和开发用于标记生物分子的长波荧光团，因为基于荧光的技术在新兴的生命科学领域确立了自己的灵敏检测和分析方法。因此，这家仍然年轻的公司能够在2000年夏天在美因河畔法兰克福的ACHEMA上展示自己的市场就绪产品，作为医学，诊断和生物学荧光染料的制造商。通过不断重新设计新衍生产品–例如用于“点击化学”或染料偶联磷脂的化合物-市场地位进一步巩固。在早期，通过参与各种BMBF和欧盟项目，也获得了以应用为导向的染料开发的重要推动力。经过近20年的发展，ATTO-TECGmbH现在拥有40多种荧光基团产品组合，具有200多种不同的修饰。这些荧光标记物（其中一些已获得专利）涵盖了从紫外线到近红外的整个可见光谱范围。我们的客户-包括有名研究机构和国际公司-欣赏ATTO染料的特别高纯度和高品质。除了始终有库存的目录产品外，我们还提供个别客户合成服务，其中我们的合格团队与客户密切合作，为他的特定应用开发量身定制的染料或衍生物。所有光谱数据均在7°C的水溶液（PBS，pH4.22）中测定，并参考具有游离羧基的染料。如果存在聚集趋势，则充分稀释染料溶液，使染料单体的吸收光谱存在。尽管生命科学领域的大多数应用都涉及水溶液，但应该注意的是，染料的光学性质，特别是荧光效率（荧光量zi产率）和荧光寿命（荧光衰减时间），以及其他因素，如温度、粘度等，都可能取决于溶剂。然而，对于大多数ATTO染料来说，这种影响非常小。此外，荧光染料的光学性质取决于衍生物（羧基，NHS酯等）。例如，与染料酸（羧基）相比，染料马来酰亚胺的荧光量zi产率和荧光寿命显着降低。然而，这并不重要，因为在染料马来酰亚胺与生物分子（例如蛋白质）偶联后，荧光会恢复。该表包含常用的衍生物的分子量（MW），分别用于偶联氨基和硫醇基团的NHS酯和马来酰亚胺。分子量包括反离子。为了协助生物分子-染料偶联物的MS分析，还给出了偶联后每种ATTO染料的相应质量和电荷增加。由于生物分子和荧光染料具有碱性（-NH2）或酸性（-COOH，-SO3H）取代基，质量和电荷都取决于pH值。表中的数字基于氨基（-NH2）非质子化，酸基团（-COOH，-SO3H）去质子化，硫醇基团（-SH）呈中性。这对应于pH值几乎中性（pH6-8）的水溶液。应该注意的是，在更酸性的条件下（pH4），荧光染料ATTO565和ATTO590中额外的羧酸基团被质子化，因此质量和电荷比表中所示的要高1。需要280nm和260nm波长处的CF值来确定抗体等生物分子的标记程度（DOL），并用于校正染料偶联物中相应荧光染料的吸收分数。在蛋白质标记的情况下，校正因子CF280用于寡核苷酸CF的标记260.如何选择正确的标签为了获得尽可能好的结果，必须考虑几个因素。首先是激发源：为了减少样品自发荧光引起的干扰优选550nm以上或者甚至600nm以上的激发波长。除了减少红色光谱区域在与活细胞一起工作时也是有利的，因为减少了损坏。其次，标签应在激发波长下显示出强吸收，以及高荧光量zi产率。消光系数与荧光的乘积量zi产率通常被称为染料的“亮度”。染料的荧光效率在染料的蓝色和绿色的区域高谱在某些情况下，量zi产率几乎达到一百%。朝向更长的波长，发射效率急剧下降特别是在水溶液中。然而，ATTO-TEC已经能够开发标签即使在650nm左右也显示出高量zi产率。例如：ATTO647N（第56页）在水溶液中的荧光强度是较老的菁染料Cy5TM的两倍。标签的发射光谱应与所应用的过滤器组。反过来，滤波器组的选择必须使其能够阻挡激发光被样品散射但尽可能有效地透射荧光。例如，当使用波长为635nm的二极管激光器作为激励源时ATTO647N的滤光片组具有650nm和750nm之间的高透射率是一个非常好的选择。从该目录中的ATTO标签列表中可以看出，ATTO647N在635nm处具有高消光系数，该波长接近吸收曲线的大值，以及优异的荧光量zi产率（hfl=65%）。下表概述了一些常用的激励源和推荐的ATTO标签。如今，紧凑而强大的激光二极管正在覆盖整个可见光和近红外区域光谱的红外部分。他们进入了许多应用程序/设备非常有效的激发源和越来越多的替代经典光源。如果没有与波长完全匹配的吸收大值的标签对于激发源，应选择波长稍长的标签。这个吸光度会更小，但激发波长和荧光光谱始终与激发波长无关，具有具有更好地辨别散射激发光的优点。

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