沉降系数定义为沉降速度与离心力的比率或单位离心场中颗粒的沉降速度,它以svedberg单位计算,1S=1×10-13s!例如,核糖核酸酶A的沉降系数为1.85×10-13s,即可记作1.85S!近年来,在生物化学、分子生物学及生物工程等书刊文献中,对于某些大分子化合物,当它们的详细结构和分子量不很清楚时,常常用沉降系数这个概念去描述它们的大小!如核糖体RNA(rRNA)有30s亚基和50s亚基,这里的s就是沉降系数,现在多地用于生物大分子的分类,特别是核酸!
储备液一般使用两种密度的蔗糖溶液或两种密度的氯化铯溶液来制备!样品一般铺在溶液的表面,然后开始离心!在实验方法上也可以采用平衡密度梯度法,在这种离心法中,介质的梯度不是预先配制,而是在离心过程中,由于离心力的作用而逐渐形成.样品物质和氯化铯的浓盐溶液充分混合均匀,离心开始之后,铯盐由于离心力的作用,自离心管口至离心管底形成连续递增的密度梯度.生物样品中不同组分物质在离心过程中沉降或上浮以寻找与自身密度相同的溶液密度梯度区带,不同的物质最终到达相应的区带,从而实现分离。
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贝克曼361625聚丙烯指封管高速离心管,所属分类:超速离心管类型:指封管包装规格:56个容量:29ml尺寸(直径X高mm):25x77适用转头:Type70Ti,Type50!2Ti,SW32Ti,SW28,MLA-50材质:聚丙烯透明度:半透明离心等密度方法等密度离心法也叫沉降平衡法.所谓等密度是指样品密度与介质的密度相等,实际上是在梯度密度介质中进行的!该技术的特点是沉降分离与样品物质的大小和形状无关,而取决于样品物质的密度。
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离心力溶液中的固相颗粒做圆周运动时产生一个向外离心力,其定义为:F=mω2r式中:F为离心力的强度;m为沉降颗粒的有效质量;ω为离心转子转动的角速度,其单位为rad/s;r为离心半径(cm),即转子中心轴到沉降颗粒之间的距离!很显然,离心力随着转速和颗粒质量的提高而加大,而随着离心半径的减小而降低!离心力通常以相对离心力Fcf表示,即离心力F的大小相对于地球引力(G)的多少倍,单位为g,其计算公式如下:Fcf=119×105(h)2r×g可以看出,在同一转速下,由于f的不同,Fcf相差会很大,实际应用时一般取平均值。
摩擦力的大小与颗粒的运动速度成正比,并且受颗粒的大小、形状及介质性质的影响:式中:f为颗粒在济剂中的摩擦系数.与颗粒的大小、形状及介质性质相关;v为颗粒的沉降速度!由于离心力的存在,颗粒将加速运动直到摩擦力与离心力相等。在这种情况下,颗粒所受到的净作用力为零,颗粒将以最大速度运动。式中Mp和Ms分别为颗粒的质量及等体积的溶剂的质量!上式中的Mp和Ms很难确定,为了建立分子大小与沉降系数之间的关系,引入了沉降系数这一新的概念!
这种方法依赖于在离心场的作用下低分子量的铯盐密度梯度的形成,一般需要长时间的离心(2~3天)。显然,样品物质的密度应介于介质梯度中zui大和zui小密度之间,否则,样品将沉到离心管的底部或漂浮到溶液的顶层。离心zui大速度方法移动界面超速离心法含几个组分的样品在足够高的离心场中离心时,每种颗粒都达到其zui大沉降速度,这时样品开始分离!离心管的上层逐渐形成透明的上清液,并形成对应于样品各组分的一系列浓度界面,界面的移动相对于每种组分来说是特征的。